Preview

Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии

Расширенный поиск
№ 2 (2016)
Скачать выпуск PDF
https://doi.org/10.36233/0372-9311-2016-2

ОРИГИНАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 

3-9 141
Аннотация
Цель. Сравнительное исследование плотных контактов и ультраструктурных изменений энтероцитов слизистых оболочек тощей кишки крыс при действии липополисахаридов и холерного токсина. Материалы и методы. Применяли липополисахариды (Sigma-Aldrich, Германия) и холерный токсин (Sigma-Aldrich, Германия). Исследование проводили на крысах линии Wistar. Воздействие липополисахаридов и холерного токсина на эпителиоциты осуществляли методом выведения сегментов тощей кишки крысы и их инкубации с указанными веществами. Проведен сравнительный анализ ультратонких срезов энтероцитов тощей кишки крыс и плотных контактов между ними в контроле и при воздействии липополисахаридов и холерного токсина. Результаты. Воздействие липополисахаридов на ультраструктуру энтероцитов тощей кишки крысы проявлялось в изменении формы клеток в результате увеличения межклеточного пространства без деструкции плотных контактов. В некоторых эпителиоцитах отмечено исчезновение десмосом, увеличение ядер и большая выраженность ЭПС. Воздействие холерогена на эпителиоциты слизистой оболочки тощей кишки крысы по ряду признаков сходно с действием липополисахаридов, что проявлялось в изменении ультраструктуры клеток, форма которых также трансформировалась в результате увеличения межклеточного пространства, деструкцией плотных контактов этот процесс не сопровождался. При действии холерного токсина наблюдали исчезновение складчатости латеральной области плазматической мембраны клеток и сокращение числа микроворсинок. Заключение. Выявлен сходный характер воздействия липополисахаридов и холерного токсина на ультраструктуру клеток и область плотных контактов энтероцитов тощей кишки крысы, оба вещества вызывали увеличение межклеточного пространства без деструкции плотных контактов.
9-15 181
Аннотация
Цель. Разработка нового подхода в генотипировании Clostridium difficile и испытание его на примере 140 госпитальных изолятов. Материалы и методы. Подход основан на идее двойного расщепления и избирательного мечения (ДРИМ), использованного ранее при генотипировании других бактериальных патогенов. Был осуществлен подбор оптимальных ферментов рестрикции MluI и Mph1103I, оптимизированы условия проведения реакции ДРИМ. Результаты. Проведено генотипирование госпитальных изолятов C.difficile, рассчитан индекс дискриминации штаммов, сделаны выводы о возможностях метода в выяснении путей распространения и идентификации источников инфекции. Заключение. Разработанный метод генотипирования имеет ряд преимуществ над существующими методами и может применяться в решении вопросов эпидемиологии инфекций, вызванных C.difficile.
16-23 385
Аннотация
Цель. Подтверждение таксономического положения штамма Lactobacillus fermentum 90 TC-4 с использованием фенотипических (классический микробиологический, MALDI TOF масс-спектрометрия) и генетических (секвенирование фрагмента гена 16S рРНК и полногеномное секвенирование) методов. Материалы и методы. Объект исследования - штаммы L. fermentum 90 TC-4 из различных коллекций. Масс-спектрометрический анализ осуществляли с помощью MALDI TOF масс-спектрометра Autoflex (Bruker Daltonics, Германия), изучение биохимических свойств штамма проводили с использованием стрипов API 50 CHL (Biomerueux, Франция), для выделения геномной ДНК использовали набор «ДНК-сорб В» (ЦНИИЭ, Москва). Секвенирование наработанных фрагментов гена 16S рРНК проводили на секвенаторе GenomeLab™ GeXP (Beckman Coulter, США), полногеномное секвенирование выполняли на платформе MiSeq (Illumina). Сборка генома и биоинформационный анализ осуществляли с использованием программы BLAST (www.blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi), «CLC Bio Assembly» и геномного сервера RAST (http:// rast.nmpdr.org). Результаты. Установлено, что штамм L. fermentum 90 TC-4 в ряде случаев загрязнен культурой L. plantarum. В результате идентификации чистой культуры штамма L. fermentum 90 TC-4 с использованием спектра высокотехнологичных методов доказано, что данный штамм относится к виду L. fermentum. Заключение. Подтвержден таксономический статус штамма L. fermentum 90 TC-4.
24-29 182
Аннотация
Цель. Выделение и изучение биологической активности антимикробных пептидов из тромбоцитов кур. Материалы и методы. В исследовании использовали пептиды из тромбоцитов кур, полученные методом обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии в ступенчатом и линейном градиентах увеличения концентрации органического растворителя. Их антимикробную активность определяли методом микротитрования в бульоне; механизм биологического действия - с помощью метода флуоресцентной спектроскопии с использованием ДНК-тропных красителей. Результаты. Из тромбоцитов кур выделены индивидуальные фракции пептидов, обладающие антимикробной активностью в отношении Staphylococcus aureus P209 и Escherichia coli K12. Установлено нарушение целостности барьерных структур микроорганизмов под воздействием тромбоцитарных антимикробных пептидов и преобладание клеток с поврежденной мембраной в популяции E.coli. Заключение. Полученные данные об антимикробной активности и механизме бактерицидного действия впервые выделенных фракций пептидов из тромбоцитов кур расширяют представление о функциональных свойствах тромбоцитов птиц и открывают перспективу для их дальнейшего изучения с целью использования в качестве антимикробного средства.
30-36 154
Аннотация
Цель. Изучить трансформацию кожной микрофлоры при развитии атопического дерматита. Материалы и методы. Обследованы 45 больных c различными формами атопического дерматита (АтД). Контрольная группа состояла из 26 здоровых лиц. Штаммы культивировали на элективных питательных средах. Идентификацию выделенных штаммов осуществляли методом MALDI-TOF масс-спектрометрии. Результаты. У больных АтД установлены низкая частота встречаемости на коже лица таксона Staphylococcus epidermidis и высокая частота встречаемости Staphylococcus aureus на коже верхних и нижних конечностей, по сравнению со здоровыми лицами. Частота встречаемости протеолити-чески активных изолятов S. aureus у больных АтД была в 3 раза выше, чем у здоровых носителей этого таксона. У больных АтД на коже нижних конечностей и шеи выявлены таксоны микрорганизмов, не свойственные здоровым лицам, такие как Bacillus mycoides, Pseudomonas putida, Pseudomonas radiobacter. Отмечена высокая частота встречаемости грибов Cryptococcus satoi, Candida albicans, Malassezia globosa. Заключение. Снижение барьерных функций кожи при АтД способствует контаминации кожи больных редкими бактериальными таксонами и грибами. Одним из возможных механизмов подавления функции иммунокомпетентных клеток могут выступать протеолитических ферменты S. aureus.
37-41 176
Аннотация
Цель. Проанализировать основные эпидемиологические показатели по ВИЧ-инфекции на территории СФО за период с 2012 по 2014 гг. с выделением вклада регионов в эпидемию для разработки персонифицированной окружной программы по сдерживанию дальнейшего распространения ВИЧ. Материалы и методы. Были использованы сведения основных статистических форм и ежемесячных отчетных данных всех регионов, расположенных на территории округа. Результаты. В целом как на изучаемой территории, так и в некоторых регионах выявлена тенденция к росту заболеваемости ВИЧ-инфекцией с преимущественным парентеральным путем передачи. ВИЧ-инфекция наиболее часто продолжает выявляться среди молодого, трудоспособного населения. Ежегодно увеличивается количество впервые выявленных больных в стадии СПИД, и отмечен рост летальности среди ВИЧ-инфицированных больных. Заключение. Указаны прогностические данные на следующий год.
41-48 342
Аннотация
Цель. Изучить N-ацетил-β-D-глюкозаминидазу (хитобиазу) (ЕС 3.2.1.30) у штаммов холерных вибрионов О1/неО1серогрупп различного происхождения, являющуюся составной частью хитинолитического комплекса с учетом объекта выделения и эпидемиологической значимости штаммов. Материалы и методы. Культуры штаммов Vibrio cholerae О1/неО1серогрупп получены из музея живых культур Ростовского НИПЧИ. Анализ ферментативной активности проведен на флюоресцентном спектрофотометре Hitachi F-2500 с использованием лицензионного программного обеспечения FL Solutions. При характеристике фермента привлекали базы данных NCBI. Результаты. Обнаружена, очищена колоночной хроматографией, изучена и охарактеризована по ряду физикохимических и биологических свойств N-ацетил-β-D-глюкозаминидаза у штаммов Vibrio cholerae О1/неО1серогрупп. Сравнительный компьютерный анализ аминокислотной последовательности N-ацетил-β-D-глюкозаминидаз холерного вибриона (ген VC2217), Serratia marcescens и др. позволил отнести фермент из V.cholerae к гликозилгидролазам (хитобиазам) семейства 20 и классифицировать согласно номенклатуре ферментов как КФ 3.2.1.30. Заключение. Впервые изучена и охарактеризована N-ацетил-β-D-глюкозаминидаза у холерных вибрионов О1/неО1серогрупп различного происхождения и эпидемиологической значимости, учавствующая в утилизации хитина, а также показана ее возможная роль в биологии возбудителя холеры.
49-56 274
Аннотация
Цель. Изучение механизмов аттенуации холодоадаптированного (ХА) штамма А/ Краснодар/101/35/59 (ffiN2) вируса гриппа, связанных с нарушением функций белка NS1. Материалы и методы. Проведено изучение интерфероногенной активности ХА штамма А/Краснодар/101/35/59 (ffiN2), его родительского варианта А/Краснодар/101/59 (ffiN2), вирулентного штамма А/WSN/33 (H1N1) и ряда одногенных и полигенных реассортантов между данными штаммами, полученных с помощью обратной генетики. Изучение динамики экспрессии гена ИФНр проводили с использованием методического подхода ОТ-ПЦР в режиме реального времени. Результаты. Было показано, что включение в состав генома вирулентного штамма А/WSN/33 (H1N1) РВ1-гена ХА штамма А/ Краснодар/101/35/59 (ffiN2) с реверсией к дикому типу не приводит к резкому изменению интерфероногенной активности реассортанта. В то же время, аналогичное включение РВ1-гена ХА штамма приводила к запредельному росту интерфероногенной активности реассортанта. С другой стороны, включение в состав генома вирулентного штамма А/ WSN/33 NP-гена дикого штамма А/Краснодар/101/59 (ffiN2) не отличалось по эффекту на интерфероногенность реассортанта от включения NP-гена ХА штамма. Заключение. На формирование аттенуационного фенотипа реассортантов могут влиять как констелляция генов родительских вариантов, так и мутации, локализованных в этих генах. Полученные результаты позволяют предположить возможные механизмы аттенуации ХА штамма, связанных с нарушением функции NS гена.
56-62 161
Аннотация
Цель. Определение величины коэффициентов термостабильности ТЭОВак для прогноза сохраняемости вакцины (специфической биологической активности) в процессе гарантийного срока хранения. Материалы и методы. ТЭОВак (таблетки жевательные) в первичной упаковке выдерживали при повышенной температуре (ускоренные и стрессиспытания) и в установленных ФСП на препарат условиях (долгосрочные испытания). Биологическую активность вакцины определяли титрованием на 12-суточных куриных эмбрионах. Результаты. Экспериментально установлена корреляция между величиной коэффициентов термостабильности и сохраняемостью приготовленных серий кондиционного препарата на конечный срок хранения. Заключение. Коэффициенты термостабильности могут быть использованы в качестве прогностического показателя качества производимой таблетированной лекарственной формы препарата для оценки сохраняемости вакцины в процессе гарантийного срока хранения.
62-69 109
Аннотация
Цель. Анализ эпидемических проявлений природно-очаговых инфекций (ПОИ), уточнение спектра их возбудителей, определение эпизоотической активности природных очагов в Крымском федеральном округе (КФО). Материалы и методы. Проведено эпизоотологическое обследование 10 административных районов КФО. 291 пул (2705 особей) иксодовых клещей и 283 пробы органов мелких млекопитающих исследованы методом ПЦР на наличие ДНК/РНК возбудителей ряда ПОИ. Результаты. Заболеваемость ПОИ в КФО регистрировалась по 6 нозологиям: клещевому боррелиозу, марсельской лихорадке, лептоспирозу, туляремии, кишечному иерсиниозу и клещевому вирусному энцефалиту, при этом трансмиссивные инфекции составили 91,6%. Установлена циркуляция возбудителей Крымской геморрагической лихорадки, лихорадки Ку, группы клещевых пятнистых лихорадок, клещевого боррелиоза, гранулоцитарного анаплазмоза человека, моноцитарного эрлихиоза человека, геморрагической лихорадки с почечным синдромом, лихорадки Западного Нила, туляремии и лептоспироза. Заключение. В связи с активностью природных очагов ПОИ для обеспечения санитарно-эпидемиологического благополучия населения КФО необходим дальнейший мониторинг эпидемиологических и эпизоотологических проявлений данных инфекций в Крыму, в том числе с использованием генетических методов анализа.

ОБЗОРЫ 

91-99 1190
Аннотация
Этиологическая диагностика сепсиса представляет собой одну из наиболее сложных проблем современной медицины в связи с широким разнообразием возбудителей сепсиса, многие из которых являются компонентами нормальной микрофлоры человека. Недостатками современного «золотого стандарта» микробиологической диагностики этиологии сепсиса методом посева крови на стерильность являются длительность культивирования, ограничение в выявлении некультивируемых форм микроорганизмов, значительное влияние предварительной эмпирической антибиотикотерапии на результат анализа. Этих недостатков лишены методы молекулярной диагностики, активно разрабатываемые и внедряемые в последнее десятилетие. В обзоре рассмотрены основные современные методы молекулярно-биологической диагностики, приведены актуальные данные по их диагностической характеристике. Особое внимание уделено методам ПЦР-диагностики, включая новые российские разработки. В сравнительном аспекте рассмотрены методы гибридизации нуклеиновых кислот и протеомного анализа. Дана оценка применения и перспектив развития методов молекулярной диагностики сепсиса.
100-107 569
Аннотация
Хронический генерализованный пародонтит (ХГП) - индуцированное бактериями заболевание тканей пародонта, поддерживающих зуб, которое характеризуется наличием процессов воспаления с разрушением костной ткани. Знание молекулярных механизмов патогенеза ХГП способствует созданию наиболее эффективных методов лечения данного заболевания. Бактериальная инфекция является первичным фактором в этиологии пародонтита, но не достаточным для его начала и последующего развития. Известно, что бактериальные факторы индуцируют местную воспалительную реакцию и активируют систему врожденного иммунитета через активацию Toll-подобных рецепторов (TLR), расположенных на поверхности резидентных клеток и лейкоцитов. Активация этих клеток приводит к выработке провоспалительных цитокинов и привлечению в зону воспаления фагоцитов и лимфоцитов. В обзоре мы рассматриваем известные данные о факторах иммунной защиты пародонта включая клеточные популяции и цитокины, а также механизмы разрушения тканей, поддерживающих зуб. Также обсуждаются перспективы лечения.
107-119 323
Аннотация
Пуриновые рецепторы располагаются на иммунных и соматических клетках организма животных и человека. Суммация сигналов с пуриновых и TOLL-подобных рецепторов происходит на уровне формирования инфламасомы и приводит к суммации первого и второго сигналов врожденного иммунитета. Первый сигнал - с PAMPs (pathogen assotia-ted molecular patterns), второй - с DAMPs (danger associated molecular patterns). Аденозинтрифосфат (АТФ) является наиболее изученным DAMP. АТФ соединяется с пуриновыми рецепторами, к которым относятся Р2 (лучше всего описаны Р2Х7 рецепторы), что приводит к открытию каналов этих рецепторов и прохождению АТФ внутрь клетки. Параллельно наблюдают выход К+ из клетки и вход Ca2+ и Na+ в клетку, что ассоциируется с активацией иммунокомпетентной клетки. Источником экстраклеточного АТФ служат погибающие путем некроза или апоптоза поврежденные клетки, а также активированные иммуноциты. В эффекторах врожденного иммунитета суммируются сигналы с Р2 и TOLL-подобных рецепторов, а активация Р2 рецепторов в лимфоцитах вносит вклад в активацию клеток, опосредованную Т-клеточным рецептором. Негативной стороной активации пуриновых рецепторов является стимулирующее влияние на пролиферацию и метастазирование опухолевых клеток. Практическим выходом знаний о функционировании пуриновых рецепторов для клинической иммунологии является применение агонистов и антагонистов пуриновых рецепторов, а также объяснение действия иммуномодуляторов с позиции запуска K+/Na+ насоса, приводящего к длительной активации иммунокомпетентных клеток.
119-126 3384
Аннотация
Хронический гепатит В осносится к категории социально значимых заболеваний в силу свой широкой распространенности во всем мире и высокой частоты неблагоприятных исходов этого заболевания. В основе развития хронической формы гепатита В лежат особенности взаимодействия вируса гепатита В с иммунной системой человека, сопровождающиеся развитием механизмов ускользания возбудителя от иммунологического надзора. В основе указанных механизмов лежат молекулярно-биологические особенности вируса гепатита В, рассмотрение которых входит в содержание данного обзора. При этом в основу характеристики взаимодействия вирусных белков с клетками иммунной системы положены стадии иммунопатогенеза данного заболевания, выделение которых принято в современной зарубежной литературе.

КРАТКИЕ СООБЩЕНИЯ 

69-74 182
Аннотация
Цель. Анализ эпидемиологических особенностей вспышки норовирусной инфекции в г. Алагире Республики Северной Осетии-Алания и эффективности мероприятий по ее ликвидации. Материалы и методы. В работе были использованы данные карт-схем систем водоснабжения г. Алагира и статистической документации Центра гигиены и эпидемиологии в Республике Северная Осетия-Алания. Индикацию норовируса в образцах клинического материала и пробах воды проводили методом полимеразной цепной реакции. Результаты. Установлен этиологический агент вспышечного заболевания - норовирус генотипа II. Выявлена реализация фекально-орального механизма водного пути передачи возбудителя норовирусной инфекции. Определены условия, способствовавшие возникновению и развитию указанной вспышки - неудовлетворительное санитарно-техническое состояние системы водоснабжения города. Заключение. Исследуемая водная вспышка норовирусной инфекции была вызвана генотипом вируса GII.17, который в настоящее время постепенно вытесняет генотип GII.IV, и характеризовалась интенсивным началом, вовлечением в эпидемический процесс всех возрастных групп населения (с преимущественным поражением взрослых), низкой семейной очаговостью, преобладанием в клинической картине форм болезни средней тяжести. Проведенные противоэпидемические мероприятия обеспечили быструю локализацию и ликвидацию вспышки норовирусной инфекции.
74-80 250
Аннотация
Цель. Клинико-эпидемиологическая характеристика лихорадки Западного Нила (ЛЗН) на территории Краснодарского края в многолетней динамике. Материалы и методы. Ретроспективно проанализированы проявления эпидемического процесса и клинических симптомов ЛЗН с 1988 по 2013 гг. на территории Краснодарского края. Использованы результаты эпидемиологических наблюдений с включением мониторинга циркуляции арбовирусов, проводимых Причерноморской противочумной станцией и Центром гигиены и эпидемиологии в Краснодарском крае. Клиническое течение верифицированной ЛЗН изучено у 62 пациентов, лечившихся в Специализированной клинической инфекционной больнице Краснодара в 1999 - 2012 годах. Результаты. Представлена клиникоэпидемиологическая характеристика случаев заболеваемости ЛЗН на территории Краснодарского края. Отмечено наличие действующих очагов арбовирусных инфекций, установлены клинические признаки заболевания, выделены группы пациентов, требующих обследования на ЛЗН. Заключение. Определен комплекс энтомолого-вирусологического мониторинга, профилактических и противоэпидемических мероприятий, которые позволят предотвратить возникновение опасных эпидемиологических проявлений очагов заболевания в будущем.
80-84 213
Аннотация
Цель. Оценка дисбиотического состояния кишечника на основе определения локального антиоксидантного индекса (ЛАИ). Материалы и методы. Обследованы 155 пациентов с бактериологически подтвержденным дисбактериозом кишечника. Контролем служили 20 человек с нормобиоценозом кишечника. Для биохимического исследования использовали разведение фекалий 10-2. Активность каталазы, супероксиддисмутазы и уровень малонового диальдегида оценивали фотометрически по величине оптической плотности образцов. Микробный пейзаж фекалий исследовали бактериологическим методом с параллельным определением в образцах копрофильтратов активности указанных ферментов и содержания малонового диальдегида. Оценку нарушенной микроэкологии кишечника осуществляли биохимическим методом путем расчета локального антиоксидантного индекса в сопоставлении с данными микробных карт. Результаты. В копрофильтратах людей с нормобиоценозом кишечника показатель ЛАИ был значительно выше 20. У пациентов с выявленным дисбактериозом кишечника, в зависимости от его степени, регистрировали изменение показателя ЛАИ в диапазоне от отрицательного до 20. У части больных дисбактериоз носил пролонгированный характер, ЛАИ был ниже 14, что отражало наличие персистирующего воспаления. При назначении пробиотического препарата наблюдали тенденцию к нормализации микробной экологии и росту ЛАИ. Заключение. Предложен скрининговый критерий, дифференцирующий степень тяжести дисбактериоза кишечника на основе расчета локального антиоксидантного индекса.
85-90 108
Аннотация
Цель. Изучение механизмов взаимодействия диагностического бактериофага эльтор с чувствительным к нему штаммом Vibrio cholerae El Tor 18507 с помощью прямого белкового профилирования, идентификация константных и вариабельных белков, участвующих во взаимодействии фага и клетки, а также углевод-специфических рецепторов фага. Материалы и методы. Использовали коммерческий препарат холерного диагностического бактериофага эльтор, штамм V.cholerae El Tor 18507. Влияние углеводов на активность бактериофага определяли путем постановки пробы с фагом классическим и модифицированным нами методом. Белковые профили исследуемых объектов изучали с помощью метода MSP-анализа. Результаты. Показано, что сахароза ингибирует литическую активность бактериофага. Были изучены протеомные профили бактериофага эльтор и чувствительного индикаторного штамма, проведена идентификация константных и вариабельных белков исследуемых объектов посредством программы MSP Peak-List. Заключение. Анализ изменения профилей фага и микробной клетки при взаимодействии с сахарозой дал основание предположить, что сахароза в смеси культура - фаг вступает во взаимодействие именно с белковыми рецепторами фага, блокируя специфичные к холерному вибриону рецепторы, что в дальнейшем проявляется в резком снижении активности фага по отношению к чувствительному штамму.

СОДЕРЖАНИЕ 



Creative Commons License
Контент доступен под лицензией Creative Commons Attribution 4.0 License.


ISSN 0372-9311 (Print)
ISSN 2686-7613 (Online)