Preview

Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии

Расширенный поиск
№ 4 (2017)
Скачать выпуск PDF
https://doi.org/10.36233/0372-9311-2017-4

ОРИГИНАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 

3-9 127
Аннотация
Цель. Исследование таксономической принадлежности коллекционных штаммов возбудителя туляремии на основе протеометрического и молекулярно-генетического методов идентификации. Материалы и методы. В работе использовано 23 штамма туляремийного микроба, изолированных в Красноярском крае и Республике Алтай с 1950 по 2015 гг. Для культивирования возбудителя использовался FT-arap. Спектры для время-пролетной масс-спектрометрии собирались на приборе Microflex LT (Bruker Daltonics, Германия) и анализировались в сравнении с предварительно дополненной базой данных программы MALDI Biotyper 3.0. ПЦР со специфическими праймерами проводилась с электрофоретической визуализацией результатов и в режиме реального времени. Результаты. Установлено, что штаммы F. tuiarensis, выделенные на юге западной Сибири с 1950 до 2010 гг., относятся к подвиду holarctica, из них 56,3% - эритромицин-чувствительные (1 биовар Erys), остальные - эритромицин-резистентные (II биовар EryR). Семь штаммов, изолированных после 2011 г., по цитруллинуреидазной активности, расщеплению глицерина и наличию фрагментов pdpA и pdpD острова патогенности (FPI) определены как среднеазиатский подвид. Заключение. Результаты ретроспективного исследования биологических свойств штаммов F. tuiarensis, выделенных на юге Сибири, показало отсутствие в коллекции Иркутского противочумного института до 2011 г. возбудителя туляремии среднеазиатского подвида. Обнаружение указанного подвида на территории Российской Федерации свидетельствует о необходимости изучения и анализа вопросов эпидемиологии, экологии и эпизоотологии возбудителя туляремии среднеазиатского подвида, а также определения границ его распространения.
9-17 107
Аннотация
Цель. Изучение возможности применения метода времяпролетной масс-спектрометрии для выявления возбудителя бруцеллеза в крови. Материалы и методы. Штаммы бруцелл: 5 Brucella melitensis и 21 Brucella abortus. Белковое профилирование в линейном режиме на MALDI-TOF масс-спектрометре Microflex «Bruker Daltonics». Результаты. Модифицирована и оптимизирована методика обеззараживания и пробоподготовки образцов крови, контаминированной бруцеллами, для анализа методом MALDI-TOF MS. Получены 120 репрезентативных белковых профилей экстрактов образцов крови, содержащей возбудитель бруцеллеза. Сформирован и проанализирован результирующий пик-лист (супер-спектр) исследуемой белковой фракции экстракта крови условно здорового человека в пределах исследуемой группы. Заключение. Предложена схема выявления бруцелл в образцах крови методом MALDI-TOF масс-спектрометрии, основанным на выявлении комплекса 15 родоспецифичных фрагментов. Охарактеризованы сигналы на масс-спектрах экстрактов лейкоцитарной фракции крови, искусственно контаминированной возбудителем бруцеллеза.
17-23 284
Аннотация
Цель. Изучение биоразнообразия, чувствительности/устойчивости к антибактериальным препаратам (АБП) штаммов условно патогенных микроорганизмов семейства Enterobacteriaceae, выделенных из поверхностных водоемов Ростова-на-Дону в 2014 - 2016 гг. Материалы и методы. Определение родовой и видовой принадлежности энтеробактерий осуществляли по результатам совокупности биохимических тестов, используя программно-аппаратный комплекс MALDI Biotyper. Чувствительность к АБП определяли методом серийных разведений. Результаты. За время исследования было выделено 468 штаммов условно патогенных и патогенных энтеробактерий. Идентифицировано 20 родов, 33 вида микроорганизмов. Доминировали представители родов Escherichia (37,0 %), Enterobacter •23.0%). Klebsiella (13,2%), Citrobacter (8,0%). Чувствительными ко всем АБП в 2014 г. были 8.5% выделенных штаммов, в 2015 г. - 5,2%, в 2016 г. микроорганизмов, чувствительных к АБП, не обнаружено. Количество полирезистентных изолятов нарастало в течение трех лет: в 2014 г. выделено 40,7 % штаммов, в 2015 г. - 60,1%, в 2016 г. - 80,0%. Высокой активностью в отношении выделенных энтеробактерий обладали цефтриаксон, гентамицин и ципрофлоксацин. Наибольшую устойчивость фиксировали к ампициллину, налидиксовой кислоте, нитрофурантоину, котримоксазолу. Заключение. Полученные результаты позволяют оценить динамику нарастания полирезистентных штаммов энтеробактерий. выделенных из поверхностных водоемов.
23-30 569
Аннотация
Цель. Изучение динамики иммунологических показателей у больных с хроническими бактериальными инфекциями при разных схемах введения вакцины Иммуновак ВП-4. Материалы и методы. У больных (20 чел., 18 - 50 лет), распределенных в две группы по типу введения вакцины, дважды (до и через 0,5 - 1,5 месяца после курса вакцинотерапии) оценивали параметры системного иммунитета и уровень специфических антител различных изотипов в сыворотке крови и слюне к вакцинным антигенам Staphylococcus nsreusii Klebsiella pneumoniae. Результаты. Местная вакцинация приводила к повышению только уровня IgA в слюне к обоим бактериальным антигенам, при этом показатели системного иммунитета до и после вакцинации не различались. Подкожная вакцинация повышала уровень сывороточных антител А- и G-изотипов к обоим бактериальным антигенам нормализовывала сниженный уровень С08+-лимфоцитов и повышенное значение зошунорегуляторного индекса; наблюдалась тенденция к повышению процента CD3+ Т-клеток и снижению процента CD4+ Т-хелперов. Заключение. Для получения комплексного эффекта вакцинотерапии необходимо разработать оптимальную схему ее сочетанного применения, которая даст возможность одновременно достичь долгосрочного не только местного, но и системного антибактериального иммунитета, а также проявить ее иммуномодулирующее действие в отношении клеточного звена.
31-35 249
Аннотация
Цель. Конструирование тест-системы для дот-иммуноанализа с использованием наночастиц коллоидного золота в качестве маркера специфических антител для детекции ботулинического токсина в клиническом материале и пищевых продуктах. Материалы и методы. В качестве маркера специфических антител использовали наночастицы золота с диаметром частиц 20 нм. IgG выделяли из поливалентной сыворотки диагностической против ботулотоксинов типов А, В, С, Е, F производства НПО «Аллерген» (Ставрополь) активностью 5000 - 10 000 ME. Ботулотоксин в клиническом материале (сыворотки крови ) от 3 больных с установленным клиническим диагнозом «ботулизм», а также пищевом продукте (солянка грибная домашняя) определяли методом дот-иммуноанализа на нитроцеллюлозной мембране. Результаты. Во всех исследованных образцах (сыворотки крови от 3 больных и солянка грибная домашняя) обнаружен ботулинический токсин, который регистрировался у больного № 1 в разведении исследуемого образца 1:2112, у больного №2 - 1:32, у больного № 3 - 1:1056, в пищевом продукте - 1:8. В отрицательном контроле (чистые культуры возбудителей дизентерии и кишечного иерсиниоза, сыворотках крови больного ОКИ и здорового человека, а также в консервированной фасоли в томатном соусе и консервированном зеленом горошке) ботулотоксин не обнаруживали. Заключение. Разработана высокочувствительная специфичная тест-система для дот-иммуноанализа на основе коммерческих противоботулинических антител, меченных частицами коллоидного золота, которая позволяет обнаруживать ботулотоксины в течение 2 ч в объеме 1 - 2 мкл исследуемого образца.
35-41 147
Аннотация
Цель. Поиск потенциальных 1NDEL-маркеров в геномах штаммов Burkholderia pseudomallei, а также оценка возможности их использования для внутривидового генотипирования. Материалы и методы. Изучены полногеномные последовательности 25 штаммов В. pseudomallei с известными географическими регионами выделения из базы данных GenBank. Поиск INDEL-маркеров осуществляли с использованием авторского программного обеспечения GeneExpert. Кластерный анализ проводили с помощью генетической дистанции по R. Sokal и С. Michener и метода ближайшего связывания. Результаты. Выявлено 11 1NDEL- маркеров, которые позволили разделить исследуемые штаммы на 13 генотипов. Определен спектр INDEL-паттернов, характерный для австралийских штаммов. Показана возможность существования определенных филогеографических паттернов таиландских изолятов. Заключение. Выявлена возможность INDEL-маркеров дифференцировать изоляты В. pseudomallei на две географические популяции (астралийского и юго-восточноазиатского происхождения), которая позволит определять источник вспышки мелиоидоза и пути распространения возбудителя.
42-48 167
Аннотация
Цель. Оценить влияние антифагового гуморального иммунного ответа на эффективность фаготерапии инфекций, связанных с оказанием медицинской помощи (ИСМП). Матереет и методы. 42 пациента, находящиеся на продленной искусственной вентиляции легких (ИВЛ) в отделении нейрореанимации, один раз в 2014 г., 4 раза в 2015 г. и один раз в 2016 г. получали коктейль бактериофагов per os по 20 мл, в том числе 6 пациентов - повторно от 3 до 5 раз. Эффективность фаготерапии оценивали по высеву штаммов-возбудителей ИСМП из проб эндотрахеального аспирата, крови, мочи и кала пациентов до и после окончания курса. Результаты. Исходно из 87,5% проб пациентов были выделены грамотрицательные патогены (Acinetobacter baumannii, Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa). В первых эпизодах фаготерапии эффективная санация была подтверждена в 54 - 62,5% случаев. Фармакокинетические исследования указывали на системный механизм действия энтеральных форм бактериофагов. Повторные курсы фаготерапии не привели к существенной эрадикации патогенов. Антифаговый иммунитет после однократного применения коктейля бактериофагов конкретного штаммового состава детектировали с помощью ИФА по наличию титра специфических IgG в диапазоне от 1/16 до 1/4096 (у пациентов, не принимавших коктейль бактериофагов, антитела отсутствовали). Заключение. Снижение санирующего эффекта бактериофага может возникать при проведении повторного курса у одного и того же пациента из-за образования антифаговых антител. Для сохранения результативности фаготерапии необходимо изменение штаммового состава коктейля бактериофагов.
48-54 200
Аннотация
Цель. Эспериментальное воспроизведение ВГЕ-инфекции на домашних карликовых свиньях (минипигах) и сравнительный анализ вирусологических и иммунологических характеристик экспериментальной инфекции. Материалы и методы. Минипиги породы Визенау (2 самки и 4 самца возрастом 50 - 60 дней и весом 5 - 10 кг) были инфицированы штаммом В ГЕ генотипа 3, выделенным из фекалий свиней в Белгородской обл. в 2013 г. Вирус вводили в виде 10% осветленного фекального экстракта (800 мкл). В течение 49 дней эксперимента у животных брали кровь (еженедельно) и фекалии ежедневно. Анти-ВГЕ IgG определяли в образцах сыворотки крови с помощью тест-системы ДС-ИФА-ANTI-HEV-G (Диагностические системы), РНК ВГЕ в образцах фекальных экстрактов и в сыворотке крови - в ОТ-ПЦР. Результаты. Минипиги породы Визенау оказались восприимчивы к заражению ВГЕ генотипа 3, у всех животных после введения вируса развилась инфекция, сопровождавшаяся присутствием РНК ВГЕ в фекалиях на протяжении двух недель и сероконверсией по анти-ВГЕ. Сравнительный анализ вирусологических характеристик экспериментальной ВГЕ-инфекции у миниатюрных и стандартных свиней показал, что у минипигов продолжительность инфекции короче, а сероконверсия по анти-ВГЕ происходит раньше. Заключение. Восприимчивость к ВГЕ генотипа 3 и меньший вес делают карликовых свиней удобной альтернативой обычным домашним свиньям и приматам для моделирования ВГЕ-инфекции in vivo.
54-58 165
Аннотация
Цель. Изучение распространенности диареегенных E.coli энтероаггрегативной группы у детей с дисбиозом кишечника. Материалы и методы. Методом ПЦР были изучены факторы вирулентности у 511 штаммов Е. сoli, выделенных при бактериологическом исследовании проб фекалий 393 детей в возрасте до 2 лет. Чувствительность к антибиотикам определяли дискодиффузионным методом, интерпретация результатов - согласно клиническим рекомендациям «Определение чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам» 2015 г. Результаты. Идентифицированы 23 штамма энтероаггрегативных E.coli (EAggEC). Все штаммы содержали ген aaf, кодирующий аггрегативно-адгезивные фимбрии и четыре других гена (aggR, ast, аар, aatA) в различных комбинациях, кодирующие факторы вирулентности EAggEC. 19 штаммов (87%) были нечувствительны к антимикробным препаратам. Резистентность к цефалоспоринам расширенного спектра была обусловлена продукцией бета-лактамазой расширенного спектра (БЛРС) генетического семейства СТХ-М и цефалоспориназой АтрС. Заключение. Результаты исследования показали, что 6 % детей с дисбиозами кишечника являются носителями EAggEC, что свидетельствует о необходимости детекции штаммов EAggEC - новой группы диареегенных Е. соli не только у пациентов с диарейным синдромом, но и при дисбиозе кишечника.
59-66 178
Аннотация
Цель. Эпидемиологическое расследование случая группового инфицирования ВИЧ-1 на основании данных, полученных общепринятыми методами диагностики, для подтверждения следственной гипотезы об умышленном инфицировании ВИЧ при гетеросексуальном контакте. Материалы и методы. Были использованы образцы плазмы крови 8 пациентов с ВИЧ-инфекцией (5 женщин и 3 мужчин) из г. Великий Новгород, направленные для проведения эпидемиологического расследования. Определение проводили на основе анализа нуклеотидных последовательностей участка гена полимеразы (pol) протяженностью 1285 нт. Результаты. Проведенное исследование позволило идентифицировать ВИЧ в клинических образцах, отправленных на экспертизу, и установить филогенетические связи между изолятами вируса, полученными как от пациентов целевой группы, так и от пациентов контрольной группы. При анализе полученных результатов можно выделить образцы, сгруппированные в отдельный кластер, что указывает на тесные родственные связи изолятов вируса, выделенного из клинического материала этих пациентов, между собой. Пациенты целевой группы заражены изолятом ВИЧ-1 циркулирующей рекомбинантной формы CRF03AB, происходящим из одного источника, что подтверждается высокой гомологией нуклеотидных последовательностей. Заключение. В ходе эпидемиологического расследования случая группового инфицирования ВИЧ-1 было определено, что заражение женщин целевой группы произошло из одного источника. Результаты филогенетического анализа указывают на наличие эпидемиологической связи внутри обследуемой группы, что подтверждает случай передачи ВИЧ-инфекции и выводы, сделанные в ходе следствия. Использование для молекулярно-филогенетического анализа данных, полученных методами лабораторной диагностики резистентности ВИЧ к антиретровирусным препаратам, позволяет в сочетании с анамнестической и следственной информацией (в контексте имеющихся доказательств) расследовать случаи инфицирования ВИЧ.
67-74 179
Аннотация
Цель. Изучить роль герпесвирусов и пневмоцист в инфекционных осложнениях у детей, рожденных ВИЧ-инфицированными матерями. Материалы и методы. Исследованы сыворотки и клетки крови от 59 детей, рожденных ВИЧ-инфицированными матерями, на наличие различных маркеров герпесвирусных инфекций и пневмоцистоза комплексом методов современной лабораторной диагностики. Результаты. Частота выявления маркеров герпесвирусных инфекций составила от 10% для вируса ветряной оспы у детей с неокончательным тестом на ВИЧ до 93% для вируса простого герпеса у ВИЧ-инфицированных детей из закрытых организованных коллективов. Признаки активной инфекции у детей с ВИЧ-инфекцией, подтвержденной лабораторно, в 2,5 раза чаще диагностировали для ВПГИ и ветряной оспы ив 1,8 раза чаще для ВГЧИ-6 и пневмоцисты, чем у детей с неокончательным тестом на ВИЧ. У детей с подтвержденной ВИЧ-инфекцией обнаружены маркеры различных стадий заболевания оппортунистическими инфекциями (ОИ): первичной острой и латентной формы инфекции, реактивации, реконвалесценции, тогда как у детей с неокончательным тестом на ВИЧ преобладали материнские антитела к герпесвирусам и пневмоцисте. Маркеры активных инфекций, за исключением ВПГИ и ВГЧИ-6, чаще выявляли у детей, проживающих в семьях, чем у детей из закрытых организованных коллективов. Заключение. Выявленная особенность - более низкий процент обнаружения маркеров активных форм ОИ у ВИЧ-нфицированных детей из социальных учреждений - обусловлена тем, что наблюдение за этими детьми осуществляют медицинские работники, имеющие необходимые знания и опыт профилактики инфекционных осложнений у ВИЧ-инфицированных, тогда как в отношении домашних детей с ВИЧ-инфекцией противоэпидемический режим должным образом часто не соблюдается. Другим фактором, способствующим распространению оппортунистических инфекций, является асоциальный образ жизни взрослых из большинства обследованных семей. Такие данные диктуют необходимость совершенствования противоэпидемического режима и профилактики оппортунистических инфекций в семейных очагах. Для этого целесообразно обследовать на маркеры герпесвирусных инфекций и пневмоцистоза не только ВИЧ-инфицированных детей, но и всех членов семьи с целью выявления источников инфекции и своевременного проведения профилактических мероприятий.

АКТУАЛЬНЫЕ ПРОБЛЕМЫ НАУКИ 

75-81 230
Аннотация
Никогда еще мировое сообщество не было так близко к цели - ликвидации полиомиелита. В 2016 году в мире зарегистрировано всего 37 случаев заболевания в трех эндемичных странах: Пакистане, Афганистане и Нигерии. Несмотря на большие успехи на заключительном этапе ликвидации полиомиелита возник ряд проблем: появление и циркуляция вакцинородственных полиовирусов и связанных с ними заболеваний, вакциноассоциированный паралитический полиомиелит, социальные и политические проблемы, влияющие на качество проведения вакцинации.

ОБЗОРЫ 

82-90 143
Аннотация
Несмотря на то, что вакцина против Haemophilus influenzae b (Hib) давно и успешно применяется, получение вакцины против нетипируемых штаммов Haemophilus influenzae (NTHi) находится только в стадии разработки. Сложности этой работы обусловлены отличительными чертами NTHi по сравнению с Hib: отсутствие полисахаридной капсулы, высокий уровень антигенной гетерогенности и особенности развития патогенеза, который включает распространение по организму со слизистых оболочек дыхательных путей. В настоящее время с целью создания вакцины активно проводятся исследования 15 поверхностных структур NTHi, Среди них белки РЕ, Р2, Р6, PD, пузырьки поверхности мембраны (OMVs) и другие. Практическое применение в настоящее время получил лишь белок PD, который был использован в качестве носителя с антигенной функцией в конъюгированных полисахаридных вакцинах против пневмонии (Prevenar; PHiD-CV). Вакцинация этими препаратами позволила снизить общую заболеваемость острым отитом у детей на 33 - 52%. Однако этот результат не может рассматриваться как окончательный, поэтому исследования и апробирование кандидат-вакцин продолжаются.
91-100 355
Аннотация
Заболевания, вызванные бактериями вида Salmonella enterica, остаются актуальной проблемой здравоохранения. Вид Salmonella enterica подразделяется на тифоидные серовары, которые вызывают системную инфекцию, и нетифоидные серовары, которые чаше всего протекают в форме гастроэнтерита с развитием воспалительной диареи. Оба типа сальмонелл являются факультативными внутриклеточными паразитами, способными инвазировать и размножаться как в профессиональных, так и в непрофессиональных фагоцитах, таких как М-клетка и энтероциты. Инвазия клеток и размножение в них связано с функционированием генов сальмонеллезных островов патогенности, которые определяют синтез третьего типа секреторных систем (ТЗСС). В отличие от серорваров сальмонелл тифоидной группы, нетифоидные серовары вызывают развитие воспалительной диареи, в развитии которой принимают участие как эффекторные молекулы ТЗСС, так и компоненты врожденного иммунитета. Рассматриваются новые подходы к лечению заболеваний, вызванных сальмонеллами через блокирование ТЗСС.
101-111 798
Аннотация
Внебольничная пневмония (ВГ1) была и остается одной из актуальных проблем здравоохранения в связи с сохраняющейся высокой заболеваемостью и смертностью. При анализе литературных данных выявляются схожие тенденции в характере иммунного ответа пациентов с вп, а именно формирование иммунного ответа по гуморальному пути (Th2) с подавлением клеточного ответа (ТЫ), при этом недостаточность клеточного и гуморального механизмов иммунитета и дисбаланс цитокинового звена определяют тяжесть течения данного заболевания. Включение в традиционную терапию иммуномодулирующих препаратов позволяет усилить ответ на уже проводимое лечение. Одним из отечественных иммуномодуляторов является препарат азоксимера бромид (полиоксиданий), назначение которого помогает сократить продолжительность и тяжесть заболевания, а также снизить частоту развития затяжных форм заболевания. Также в последние годы среди иммуномодулирующих препаратов особый интерес вызывают иммуномодуляторы бактериального происхождения, на основе которых конструируются антибактериальные терапевтические вакцины. Среди отечественных препаратов указанной группы выделяется поликомпонентная вакцина Иммуновак ВП-4. За прошедшие годы клиникоиммунологический эффект действия Иммуновак ВП-4 исследован при разных патологиях и методах введения у взрослых и детей. Выявленные особенности действия Иммуновак ВП-4 подтверждают первичность нарушений иммунной системы, на фоне чего развивается та или иная патология, что является основанием для включения в базисную терапию заболеваний иммуномодулирующих препаратов.
112-126 220
Аннотация
Высокая патогенность возбудителя сибирской язвы в сочетании с уникальной устойчивостью споровых форм к воздействию факторов внешней среды ставят его в разряд крайне опасных биологических агентов. Зарегистрированные и успешно применяемые сибиреязвенные вакцины внесли неоценимый вклад в улучшение эпидемиологической ситуации в мире. Тем не менее, пренебрежение к мерам специфической профилактики может привести к драматическому развитию событий и потребовать проведения масштабных мероприятий по ликвидации последствий. Усилия по разработке вакцин нового поколения направлены на увеличение безопасности, уменьшение кратности введения и совершенствованию технологии производства. В обзоре представлены основные сведения о лицензированных сибиреязвенных вакцинах, предназначенных для медицинского применения на территории Российской Федерации и за рубежом. Среди многочисленных экспериментальных разработок внимание уделено перспективным препаратам, производимым различными биофармацевтическими компаниями в соответствии со стандартами GMP и проходившим в 2016 г. различные фазы клинических исследований.

СОДЕРЖАНИЕ 



Creative Commons License
Контент доступен под лицензией Creative Commons Attribution 4.0 License.


ISSN 0372-9311 (Print)
ISSN 2686-7613 (Online)