Preview

Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии

Расширенный поиск

Колонизационная активность клинических изолятов дрожжевых грибов рода Candida и их антибиотикочувствительность

https://doi.org/10.36233/0372-9311-2020-97-5-4

Полный текст:

Аннотация

Введение. Развитие микозов связывают с иммунокомпрометацией макроорганизма. Задачей исследования было изучение колонизационной активности и резистентности дрожжевых грибов рода Candida, выделенных из клинического материала в 2014 и 2019 гг. в Москве.

Материалы и методы. Диско-диффузным методом определяли антибиотикочувствительность 75 штаммов дрожжевых грибов следующих видов: C. albicans, C. parapsilosis, C. glabrata, C. krusei (Pichia kudriavzevii), C. intermedia, C. tropicalis, C. lusitaniae (Clavispora lusitaniae), C. guilliermondii (Meyerozyma guilliermondii). В 2014 г. выделены 34 штамма у людей с гиперчувствительностью в анамнезе (27 — с кожных покровов, 7 — со слизистой ротовой полости), в 2019 г выделили 41 штамм со слизистой влагалища людей с онкологическими заболеваниями. Использовали диски с флуконазолом (40 мкг), нистатином (80 мкг), клотримазолом (10 мкг), итраконазолом (10 мкг), амфотерицином В (40 мкг).

Результаты. В 2014 г. колонизационная активность убывала в ряду: C. albicans (23,53%), C. tropicalis (20,59%), C. guilliermondii (20,59%), C. parapsilosis (17,65%), C. glabrata (17,65%); в 2019 г. — C. parapsilosis (21,95%), C. albicans (17,07%), C. tropicalis (12,19%), C. guilliermondii (12,19%), C. krusei (9,76%), C. glabrata (9,76%), C. lusitaniae (9,76%), C. intermedia (7,32%). Выделенные в 2014 г. грибы обладали чувствительностью ко всем антимикотикам, за исключением 16,67% штаммов C. glabrata (флуконазол) и 14,28% штаммов C. tropicalis (нистатин). Выделенные в 2019 г. 11,11% C. parapsilosis и 40% C. tropicalis были резистентны ко всем антимикотикам; 71,43% C. albicans, 50% C. glabrata, 20% C. guilliermondii — к флуконазолу; 28,57% C. albicans — к нистатину, клотримазолу, итраконазолу, амфотерицину В; 25% C. glabrata — к амфотерицину В; C. krusei — к клотримазолу (100%), флуконазолу и нистатину (50%), итраконазолу и амфотерицину В (25%); C. lusitaniae — к флуконазолу и нистатину (100%), клотримазолу и амфотерицину В (75%), итраконазолу (50%).

Заключение. В течение 5 лет в Московском регионе расширился спектр выявляемых видов грибов за счет C. krusei, C. lusitaniae и C. intermedia (26,86% кандидозов в 2019 г). При этом дрожжевые грибы, выделенные в 2019 г, отличаются высоким количеством резистентных штаммов по сравнению с грибами, выделенными в 2014 г.

Введение

Системные кандидозы стали общемировой проблемой, обусловленной высокой смертностью, скоростью распространения инфекции, курсирова­нием резистентных штаммов, особенно в условиях стационара. Полагают, что это связано с развити­ем медицинских технологий и увеличением коли­чества иммунокомпрометированных людей [1][2][3]. Современные исследования направлены на изуче­ние механизмов, лежащих в основе изменения ви­рулентности и адгезивных свойств микроорганиз­мов, демонстрации ими резистентности или проме­жуточной чувствительности в случаях применения рекомендованных концентраций антимикотиков [4][5][6][7][8][9]. Значительное место в исследованиях зани­мают вопросы видового разнообразия и частоты встречаемости разных видов дрожжевых грибов в клинической практике в различных регионах мира, условий, влияющих на устойчивость грибов к антифунгальным препаратам [1][2][10][11].

Задачей исследования было изучение колони­зационной активности и резистентности разных видов дрожжевых грибов рода Candida, выделен­ных в 2014 и 2019 гг. в Москве из клинического материала группы иммунокомпрометированных людей.

Материалы и методы

В работе использовали 75 штаммов дрожже­вых грибов следующих видов: C. albicans, C. parapsilosis, C. glabrata, C. krusei (Pichia kudriavzevii), C. intermedia, C. tropicalis, C. lusitaniae (Clavispora lusitaniae), C. guilliermondii (Meyerozyma guilliermondii). В 2014 г. в Москве выделены 34 штамма (27 штаммов с кожных покровов, 7 — со слизистой ротовой полости) у людей с аллергическими заболе­ваниями в анамнезе (пациенты аллергологтеского центра НИИВС им. ИИ Мечникова). Затем штам­мы были размещены в рабочей коллекции культур дрожжей кафедры биологии почв факультета почво­ведения МГУ им. М.В. Ломоносова. В 2019 г. в ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина» выделили 41 штамм со слизистой влагалища пациенток.

Антибиотикочувствительность грибов опре­деляли диско-диффузным методом при помощи расширенного набора дисков с противогрибными препаратами согласно прилагаемой инструкции (НИЦФ, Россия; НИИЭМ им. Пастера, Россия). Использовали агаризованную глюкозо-пептонную среду лабораторного приготовления (агар — 20 г/л, пептон—5 г/л, дрожжевой экстракт—2,5 г/л, глюкоза — 10 г/л). Готовили разведение каждого штамма, соответствующего по плотности 0,5 по

стандарту МакФарланда и содержащего примерно 1,4 х 108 КОЕ/мл. Разведения в объеме 1 мл наноси­ли на поверхность плотной среды в чашках Петри и тщательно растирали шпателем до тех пор, пока поверхность не становилась полностью сухой. Че­рез 15 мин после инокуляции на поверхность пи­тательной среды помещали диски с антибиотиками (амфотерицин В — 40 мкг, нистатин — 80 мкг, клотримазол — 10 мкг, флуконазол — 40 мкг, итраконазол — 10 мкг). Чашки со всеми исследуемыми штаммами параллельно инкубировали при 25°С и 37°С в течение 72 и 24 ч соответственно. Учет ре­зультатов проводили в отраженном свете при помо­щи штангенциркуля. Диаметр зон подавления роста измеряли с точностью до 1 мм. Все штаммы иссле­довали для каждого антибиотика в 3 повторностях.

Результаты

Виды дрожжевых грибов, выделенные в 2014 г., по колонизационной активности можно разделить на 3 группы:

  • C. albicans (23,53%);
  • C. tropicalis (20,59%), C. guilliermondii (20,59%);
  • C. parapsilosis (17,65%), C. glabrata (17,65%).

Виды дрожжевых грибов, выделенные в 2019 г., по частоте выявления можно распределить на 5 групп:

  • C. parapsilosis (21,95%);
  • C. albicans (17,07%);
  • C. tropicalis (12,19%), C. guilliermondii (12,19%);
  • C. krusei (9,76%), C. glabrata (9,76%), C. lusitaniae (9,76%);
  • C. intermedia (7,32%).

В таблице представлены данные по относи­тельному количеству штаммов дрожжевых грибов, продемонстрировавших резистентность и промежу­точную чувствительность in vitro к антимикотикам.

Относительное количество штаммов дрожжевых грибов, продемонстрировавших резистентность и промежуточную чувствительность in vitro к антимикотикам
Relative number of yeast strains demonstrating resistance and intermediate sensitivity in vitro to antimycotics

Обсуждение

В исследовании, проведенном с 1992 по 2001 г., сообщалось, что частота выявления с. albicans в качестве доминирующего этиологического агента кандидозов составляла 55,92% [12]. С течением вре­мени во многих странах в качестве инфекционных агентов кандидозов стали выявлять другие виды, ко­торые постепенно заняли ведущее положение, как, например, с. parapsilosis, с. tropicalis, с. glabrata [13]. В исследовании, проведенном в Москве в 2013-2015 гг. в группе больных туберкулезом, были выявлены следующие основные виды: с. albicans (26,9%), С. glabrata (22,07%), с. krusei (16,55%), С. tropicalis (11,72%), с. parapsilosis (6,9%); 15,86% штаммов принадлежали к следующим видам — C. dubliniensis, C. famata, C. guilliermondii, C. kefyr, C. lipolytica, C. lusitaniae, C. norvegensis, C. rugosa, C. zeylanoides (от 1 до 4 штаммов) [14]. Интерес­но, что в нашем исследовании в этот период вре­мени ведущим этиологическим агентом был также с. albicans, но, например, с. guilliermondii занимал второе место по частоте выявления. Однако коли­чество обнаруженных видов грибов было значи­тельно меньше. В нашем случае в течение 5 лет расширился спектр выявляемых видов за счет С. krusei, с. lusitaniae и с. intermedia. В Ростовском регионе в 2019 г. этими видами были обусловлены 26,86% кандидозов. В первую группу видов гри­бов по колонизационной активности переместился С. parapsilosis, а с. albicans занял место во второй группе. Однако разница в частоте выявления меж­ду этими видами в разные периоды времени не­велика — 5,88% в 2014 г. и 4,88% в 2019 г. Виды С. tropicalis и с. guilliermondii в 2019 г. выявлялись значительно реже, практически в 2 раза относи­тельно показателей 2014 г. Очевидно, это связано с появлением в клиническом материале дополнитель­ных трех видов дрожжевых грибов (с. krusei, с. lusitaniae и с. intermedia). Но результатом исследова­ния, требующим особого внимания, является раз­ница в чувствительности к антимикотикам дрожже­вых грибов, выделенных в 2014 и в 2019 гг. Грибы, выделенные в 2014 г., демонстрировали чувстви­тельность in vitro ко всем антифунгальным препара­там. Исключением стали небольшая часть штаммов с. glabrata и с. tropicalis, резистентные к флуконазолу и нистатину соответственно (см. таблицу). Также часть штаммов этих видов продемонстри­ровала промежуточную чувствительность к итраконазолу. В 2019 г., несмотря на меньшую ча­стоту встречаемости в клиническом материале с. albicans, порядка трети штаммов этого вида ока­зались резистентными in vitro к 4 антимикотикам, а к флуконазолу — 71,43% штаммов. Виды кандид, ранее (в 2014 г.) не выявлявшиеся в клинической практике в качестве инвазивных агентов, но вы­деленные в 2019 г., отличаются высокой степенью распространения резистентных штаммов, за ис­ключением с. intermedia (см. таблицу). Некоторые исследователи отмечают, что одной из причин де­монстрации резистентности дрожжевыми гриба­ми, например к флуконазолу, является проведение профилакттеской антифунгальной терапии [2]. Стоит заметить, что устойчивость к азольным антифунгальным препаратам отмечалась у с. glabrata и с. krusei ранее [2][12]. В 2005 г. в Московском регио­не было показано, что порядка 10% штаммов грибов рода Candida, выделенных из клинического матери­ала, демонстрировали резистентность к флуконазолу и итраконазолу [15]. В связи с этим разрабатыва­ются новые антимикотические средства, имеющие другие мишени воздействия, например пептидные или иммунологтеские препараты [3][16].

Таким образом, в настоящее время наиболее высокой степенью колонизационной активности в отношении человеческого организма отличаются C. parapsilosis и C. albicans. При этом происходит значительное изменение видового разнообразия, сопровождающееся выявлением в клиническом материале C. krusei, C. lusitaniae и C. intermedia, причем первые два вида отличаются высоким процентом резистентных штаммов. Среди доминирующих видов дрожжевых грибов также отмечено появление антибиотикоустойчивых штаммов.

Список литературы

1. Krcmery V, Barnes AJ. Non-albicans Candida spp. causing fungaemia: pathogenicity and antifungal resistance. J. Hosp. Infect. 2002; 50(4): 243-60. https://doi.org/10.1053/jhin.2001.1151

2. Aquino V.R., Lunardi L.W., Goldani L.Z., Barth A.L. Prevalence, susceptibility profile for fluconazole and risk factors for candidemia in a tertiary care hospital in southern Brazil. Braz. J. Infect. Dis. 2005; 9(5): 411-8. https://doi.org/10.1590/s1413-86702005000500009

3. Di Mambro T., Guerriero I., Aurisicchio L., Magnani M., Marra E. The yin and yang of current antifungal therapeutic strategies: how can we harness our natural defenses? Front. Pharmacol. 2019; 10: 80. https://doi.org/10.3389/fphar.2019.00080

4. Леонов В.В., Миронов А.Ю., Леонова Л.В., Никитина Л.Ю. Этиологическая структура и биологические свойства возбудителей инфекций кровотока. Клиническая лаборатор¬ная диагностика. 2016; 61(11): 790-3. https://doi.org/10.18821/0869-2084-2016-11-790-793

5. Gale C., Finkel D., Tao N., Meinke M., McClellan M., Olson J., et al. Cloning and expression of a gene encoding an integrin-like protein in Candida albicans. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1996; 93(1): 357-61. https://doi.org/10.1073/pnas.93.1.357

6. Jensen R.H. Resistance in human pathogenic yeasts and fila-mentous fungi: prevalence, underlying molecular mechanisms and link to the use of antifungals in humans and the environ-ment. Dan. Med. J. 2016; 63(10): B5288.

7. Yao D., Chen J., Chen W., Li Z., Hu X. Mechanisms of azole resistance in clinical isolates of Candida glabrata from two hos-pitals in China. Infect. Drug Resist. 2019; 12: 771-81. https://doi.org/10.2147/IDR.S202058

8. Arastehfar A., Daneshnia F., Zomorodian K., Najafzadeh M.J., Khodavaisy S., Zarrinfar H., et al. Low level of antifungal re-sistance in iranian isolates of Candida glabrata recovered from blood samples in a Multicenter Study from 2015 to 2018 and potential prognostic values of genotyping and sequencing of PDR1. Antimicrob. Agents Chemother. 2019; 63(7): e02503-18. https://doi.org/10.1128/aac.02503-18

9. Jacobsen I.D., Wilson D., Wachtler B., Brunke S., Naglik J.R., Hube B. Candida albicans dimorphism as a therapeutic target. Expert. Rev. Anti Infect. Ther. 2012; 10(1): 85-93. https://doi.org/10.1586/eri.11.152

10. Munoz P., Sanchez-Somolinos M., Alcala L., et al. Candida krusei fungaemia: antifungal susceptibility and clinical presen-tation of an uncommon entity during 15 years in a single general hospital. J. Antimicrob. Chemother. 2005; 55(2): 188-93. https://doi.org/10.1093/jac/dkh532

11. Tan T.Y., Tan A.L., Tee N.W., Ng L.S. A retrospective analysis of antifungal susceptibilities of Candida bloodstream isolates from Singapore hospitals. Ann. Acad. Med. Singap. 2008; 37(10): 835-40.

12. Pfaller M.A., Diekema D.J. Twelve years of fluconazole in clinical practice: global trends in species distribution and fluco-nazole susceptibility of bloodstream isolates of Candida. Clin. Microbiol. Infect. 2004; 10(Suppl. 1): 11-23. https://doi.org/10.1111/j.1470-9465.2004.t01-1-00844.x

13. Karabijak N., Alem N. Antifungal susceptibility profiles of Candida species to triazole: application of new CLSI species-specific clinical breakpoints and epidemiological cutoff values for characterization of antifungal resistance. Mikrobiyol. Bul. 2016; 50(1): 122-32. (in Turkish)

14. Кулько А.Б. Активность in vitro анидулафунгина в отношении дрожжевых грибов возбудителей системных и диссеминированных микозов. Онкогематология. 2015; 10(3): 51-55. https://doi.org/10.17650/1818-8346-2015-103-53-57

15. Кулько А.Б., Митрохин С.Д., Мороз А.М. Микотическая инфекция дыхательных путей во фтизиатрической практике: видовой состав и чувствительность клинических штаммов грибов рода Candida к антифунгальным препаратам. Антибиотики и химиотерапия. 2005; 50(4): 14-7.

16. Li R., Zhang L., Zhang H., Yi Y, Wang L., Chen L., et al. Protective effect of a novel antifungal peptide derived from human chromogranin a on the immunity of mice infected with Candida krusei. Exp. Ther. Med. 2017; 13(5): 2429-34. https://doi.org/10.3892/etm.2017.4290


Об авторах

Ирина Гавриловнав Ахапкина
ФГБНУ Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова
Россия

Ахапкина Ирина Гавриловнав — кандидат биологических наук, ведущий научный сотрудник.

105064, Москва


Анна Марковна Глушакова
ФГБНУ Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова; ФГБОУ ВО Московский государственный университет им. М.В. Ломоносова
Россия

Глушакова Анна Марковна — кандидат биологических наук, научный сотрудник НИИ вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова; младший научный сотрудник каф. биологии почв факультета почвоведения МГУ им. М.В. Ломоносова.

105064, 119991, Москва



Евгения Николаевна Родионова
ФГБНУ Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова
Россия

Родионова Евгения Николаевна — лаборант.

105064, Москва



Алексей Владимирович Качалкин
ФГБОУ ВО Московский государственный университет им. М.В. Ломоносова; ФГБУН Институт биохимии и физиологии микроорганизмов им. Г.К. Скрябина, РАН
Россия
Качалкин Алексей Владимирович — кандидат биологических наук, ведущий научный сотрудник каф. биологии почв факультета почвоведения МГУ им. М.В. Ломоносова; Всероссийская коллекция микроорганизмов, ИФМ им. Г.К. Скрябина, РАН.119991, 142290, Пущино 


Просмотров: 86


Creative Commons License
Контент доступен под лицензией Creative Commons Attribution 4.0 License.


ISSN 0372-9311 (Print)
ISSN 2686-7613 (Online)