Preview

Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии

Расширенный поиск

ПОЛУЧЕНИЕ РЕКОМБИНАНТНОГО АНАЛОГА КАПСИДНОГО БЕЛКА ВИРУСА ГЕПАТИТА Е 1 ГЕНОТИПА: КЛОНИРОВАНИЕ, ЭКСПРЕССИЯ, ОЧИСТКА, ОЦЕНКА АНТИГЕННЫХ СВОЙСТВ

https://doi.org/10.36233/0372-9311-2017-6-72-80

Полный текст:

Аннотация

Цель. Разработка рекомбинантного аналога капсидного белка вируса гепатита Е (ВГЕ) 1 генотипа и исследование его антигенных свойств. Материалы и методы. Штаммы Escherichia coli, плазмидные векторы, серологический и клинический материал, иммуноферментные тест-системы. Молекулярно-биологические, биоинформационные, биотехнологические, биохимические и серологические методы. Результаты. С использованием рекомбинантной плазмиды, содержащей ДНК-копию субгеномной бицистронной РНК ВГЕ 1 генотипа, получен штамм E.coli - продуцент рекомбинантного антигена ORF2, содержащего С-концевой фрагмент капсидного белка ВГЕ в виде слитного с (3-галактозидазой E.coli полипептида. Рекомбинантный белок выделен из телец включений биомассы штамма-продуцента и очищен методом эксклюзионной хроматографии. С помощью вестерн-блоттинга показано взаимодействие полученного полипептида с пулом сывороток крови больных гепатитом Е (ГЕ). Антигенная специфичность белка подтверждена методом иммуноферментного анализа с сыворотками крови больных ГЕ и реконвалесцентов и групп сравнения: здоровых доноров, больных гепатитами А, В, С, ВИЧ-инфицированных, больных инфекционным мононуклеозом и цитомегаловирусной инфекцией. Заключение. Разработан рекомбинантный антиген ORF2 ВГЕ 1 генотипа и экспериментально показана возможность его применения в диагностических тестах.

Об авторах

Г. И. Алаторцева
НИИ вакцин и сывороток им. И.И.Мечникова
Россия


А. В. Сидоров
НИИ вакцин и сывороток им. И.И.Мечникова
Россия


Л. Н. Нестеренко
НИИ вакцин и сывороток им. И.И.Мечникова
Россия


Л. Н. Лухверчик
НИИ вакцин и сывороток им. И.И.Мечникова
Россия


В. B. Доценко
НИИ вакцин и сывороток им. И.И.Мечникова
Россия


И. И. Амиантова
НИИ вакцин и сывороток им. И.И.Мечникова
Россия


В. Ю. Кабаргина
НИИ вакцин и сывороток им. И.И.Мечникова
Россия


А. В. Милованова
НИИ вакцин и сывороток им. И.И.Мечникова
Россия


Д. С. Воробьев
НИИ вакцин и сывороток им. И.И.Мечникова
Россия


Ю. И. Аммур
НИИ вакцин и сывороток им. И.И.Мечникова
Россия


В. М. Блинов
НИИ вакцин и сывороток им. И.И.Мечникова
Россия


А. З. Нурматов
НПО «Профилактическая медицина»
Россия


З. Ш. Нурматов
НПО «Профилактическая медицина»
Россия


Д. А. Байызбекова
НПО «Профилактическая медицина»
Россия


О. Т. Касымов
НПО «Профилактическая медицина»
Россия


К. К. Кюрегян
НИИ вакцин и сывороток им. И.И.Мечникова, Российская медицинская академия непрерывного профессионального образования
Россия


М. И. Михайлов
НИИ вакцин и сывороток им. И.И.Мечникова, Российская медицинская академия непрерывного профессионального образования
Россия


С. В. Жаворонок
Белорусский государственный медицинский университет
Россия


В. В. Зверев
НИИ вакцин и сывороток им. И.И.Мечникова
Россия


Список литературы

1. Алаторцев В.Е., Алаторцева Г.И. Патент РФ, 1992, № 2071501 на изобретение «Вектор pEL5a, предназначенный для экспрессии чужеродной ДНК».

2. Алаторцев В.Е., Алаторцева Г.И. Патент РФ, 1992, № 2043409 на изобретение «Штамм бактерий Escherichia coli, используемый для получения рекомбинантных белков».

3. Алаторцева Г.И., Гринев А.А., Амиантова И.И. и др. Получение рекомбинантных полипептидов, содержащих антигенные детерминанты вируса гепатита Е. Вопросы вирусологии. 1998, 43 (6): 266-269.

4. Алаторцева Г.И., Сидоров А.В., Нестеренко Л.Н. и др. Получение рекомбинантного аналога гликопротеина е вируса Varicella zoster: клонирование, экспрессия и исследование антигенных свойств. Эпидемиология и вакцинопрофилактика. 2016, 15, 1 (86): 77-85.

5. Гловер Д. Новое в клонировании ДНК. Методы. М., 1989.

6. Практическая химия белка. М., 1989.

7. Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбрук Дж. Методы генетической инженерии. Молекулярное клонирование. М., Мир, 1984.

8. Hyams С., Mabayoje D.A., Copping R. et al. Serological cross reactivity to CMV and EBV causes problems in the diagnosis of acute hepatitis E virus infection. J. Med. Virol, 2014, 86 (3): 478-483.

9. Koonin E.V., Gorbalenya A.E., Purdy M.A. et al. Computer-assisted assignment of functional domains in the nonstructural polyprotein of hepatitis E virus: delineation of an additional group of positive-strand RNA plant and animal viruses. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1992, 89 (17): 8259-8263.

10. Kumar S., Tamura K., Nei M. MEGA 3: Integrated software for molecular evolutionary genetics analysis and sequence alignment. Briefings in Bioinformatics. 2004, 5: 150-163.

11. Kyte J., Doolittle R.F. A simple method for displaying the hydropathic character of a protein. J. Mol. Biol. 1983, 157 (1): 105-132.

12. Li S.W., Zhang J., He Z.Q. et al. Mutational analysis of essential interactions involved in the assembly of hepatitis E virus capsid. J. Biol. Chem. 2005, 280 (5): 3400-3406.

13. Osterman A. et al. Systematic screening for novel, serologically reactive Hepatitis E Virus epitopes. Virology J. 2012, 9: 28-32.

14. Resenchuk S.М., Blinov V.M. Alignment service: creation and processing of alignments of sequences of unlimited length. Comput. Appl. Biosci. (CABIOS). 1995, 11 (1): 7-11.

15. Towbin H., Staehlin Т., Gordon Y. Electrophoretic transfer of proteins from polyacrylamide gels to nitrocellulose sheets: procedure and some applications. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1979, 76 (9): 4350-4359.

16. Ulanova T.I., Obriadina A.P., Talekar G. et al. A new artificial antigen of the hepatitis E virus. J. Immunoassay Immunochem. 2009, 30 (1): 18-39.

17. Xinjie Wang, Qin Zhao, Lu Dang et al. Characterization of two novel linear В-cell epitopes in the capsid protein of avian hepatitis E virus (HEV) that are common to avian, swine, and human HEVs. J. Virol. 2015, 4, 89 (10): 5491-501.

18. Yamashita Т., Mori Y, Miyazaki N. et al. Matsuura biological and immunological characteristics of hepatitis E virus-like particles based on the crystal structure. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2009, 106 (31): 12986-12991.


Рецензия

Просмотров: 251


Creative Commons License
Контент доступен под лицензией Creative Commons Attribution 4.0 License.


ISSN 0372-9311 (Print)
ISSN 2686-7613 (Online)