Preview

Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии

Расширенный поиск

Применение ультрафильтрационных мембран для очистки и концентрирования вируса полиомиелита типа 1 штамм Сэбина

https://doi.org/10.36233/0372-9311-94

Полный текст:

Аннотация

Введение. Со времени создания инактивированных полиомиелитных вакцин различные стадии производственного процесса изменялись и совершенствовались. Современное производство вакцин на основе как диких, так и аттенуированных штаммов включает несколько технологических стадий, одной из которых является концентрирование вируссодержащей жидкости, позволяющее сконцентрировать вирус полиомиелита и очистить вируссодержащую жидкость от значительной части балластных компонентов.

Целью исследования были сравнительная характеристика ультрафильтрационных мембран и подбор мембраны, обеспечивающей оптимальные показатели очистки и концентрирования вируса полиомиелита типа 1 (штамм Сэбина).

Материалы и методы. Для проведения работ по концентрированию использовали лабораторные ультрафильтрационные системы двух производителей с мембранами 50, 100 и 300 кДа. Полученные результаты оценивали по содержанию общего белка, составляющего основную нагрузку на последующие стадии очистки, количеству инфекционного титра вируса в концентрате и содержанию D-антигена как целевого продукта. Оценивали также фактическое отсечение компонентов вируссодержащей жидкости различными мембранами для определения состава белковой нагрузки на целевой продукт.

Результаты и обсуждение. Содержание D-антигена и очистка от примесных белков (содержание общего белка в концентрате) были наиболее оптимальными при концентрировании с использованием мембраны с отсечением 300 кДа. Вне зависимости от показателя отсечения мембраны, подавляющая часть клеточных компонентов вируссодержащей жидкости не отсекается на стадии осветляющей и стерилизующей фильтрации, а концентрируется и составляет основную белковую нагрузку на целевой продукт.

Заключение. С точки зрения качества получаемого целевого продукта и технологичности производственного процесса использование мембраны 300 кДа является наиболее целесообразным при отработке технологии изготовления инактивированных полиомиелитных вакцин с использованием штаммов Сэбина вируса полиомиелита и культуры клеток линии Vero в качестве культуры-продуцента.

Введение

История результативной борьбы с полиомиелитом насчитывает более 60 лет со времени создания моно-, би- и трехвалентных инактивированных и живых вакцин [1].

Использование этих вакцин с середины 1950– 1960-х гг. позволило не только снизить заболеваемость полиомиелитом по всему миру, но и начать реализацию программы по искоренению этого заболевания [1]. Наиболее широко оба вида вакцин применялись в форме трехвалентных препаратов.

Присутствие в пероральной полиомиелитной вакцине живых аттенуированных штаммов полиовируса в редких случаях приводит к возникновению вакциноассоциированного паралитического полиомиелита или к вспышкам циркулирующего вакцинно-родственного полиовируса [2]. Для исключения подобных рисков большинство экономически развитых стран либо полностью перешли на использование только инактивированной полиомиелитной вакцины (ИПВ), либо применяют её в комбинации с пероральной полиомиелитной вакциной [1].

Для производства ИПВ до сих пор многие производители используют высоковирулентные (дикие) штаммы полиовируса. Всемирная организация здравоохранения в целях повышения биобезопасности процесса приготовления ИПВ рекомендует использовать в качестве вакцинных штаммов аттенуированные штаммы полиовируса, которые способны индуцировать нейтрализующие антитела как к аттенуированным, так и к диким штаммам вируса [3].

Производство ИПВ включает несколько стадий:

  • наработка клеточной и вирусной биомассы из чувствительных к вакцинным штаммам полиовируса культур клеток;
  • фильтрация и концентрирование вируссодержащей жидкости (ВСЖ);
  • очистка и инактивация вируса формальдегидом [4].

Традиционно для культивирования клеточных линий используют различные питательные среды с добавлением эмбриональной телячьей сыворотки в качестве ростового фактора. Это приводит к тому, что в составе ВСЖ находятся различные белки сывороточного происхождения, клеточные компоненты и производные питательной среды, составляющие основную белковую нагрузку на дальнейшую стадию очистки вакцинного полуфабриката.

Для грубой очистки ВСЖ от вышеперечисленного балласта применяют осветляющую и стерилизующую фильтрации [4].

Полученный фильтрат концентрируют. Процесс концентрирования проводят с использованием тангенциальной ультрафильтрации (УФ). Эта стадия получения вакцины является одной из основных стадий производства ИПВ, поскольку позволяет не только сконцентрировать вирус полиомиелита, но и очистить ВСЖ от значительной части балластных компонентов. Принципиальная схема установки для ультрафильтрации и пример потоков жидкости в мембранах кассетного типа представлены на рис. 1.


Рис. 1. Схема ультрафильтрации
.
a — принципиальная схема установки для ультрафильтрации: 1 — питающий насос; 2 — рециркуляционный насос; 3 — линия фильтрата; 4 — линия концентрата.
б — направление потоков жидкости в кассете: 1 — исходная жидкость; 2 — концентрат; 3 — фильтрат.
Fig. 1. Ultrafiltration scheme.
a — schematic diagram of the ultrafiltration system: 1 — feed pump; 2 — recirculation pump; 3 — filtrate; 4 — concentrate.
b — example of cassette flow path: 1 — initial liquid; 2 — concentrate; 3 — filtrate.

Для УФ различных биопродуктов используют мембраны с широким диапазоном по НОММ (номинальное отсечение по молекулярной массе), которое определяет мельчайший белок, отсекаемый мембраной: от 5 до 300 кДa, однако для концентрирования вируса полиомиелита как в лабораторных, так и в промышленных масштабах применяют УФ-мембраны с отсечением 100 кДа [5–7].

Нами не обнаружены исследования в области подбора современного УФ-оборудования для концентрирования вируса полиомиелита. В зарубежной научной литературе имеются публикации, связанные с концентрированием вируса полиомиелита с помощью центрифугирования [8] или с применением устаревших методов ультрафильтрации, без подробного описания и анализа [9–11]. В отечественной научной литературе встречаются обзоры [12] и публикации о сравнительном анализе УФ-мембран для очистки и концентрирования других вирусов, например вируса гриппа [13].

Цель настоящей работы — подбор УФ-мембраны, обеспечивающей оптимальные показатели очистки и концентрирования вируса полиомиелита типа 1 (штамм Сэбина). Для достижения поставленной цели были поставлены следующие задачи:

  • провести сравнительную оценку характеристик УФ-мембран разных производителей;
  • оценить влияние на качество целевого продукта мембран с разными показателями по отсечению;
  • сравнить фактическое отсечение компонентов ВСЖ различными мембранами для определения состава белковой нагрузки на целевой продукт.

Качество получаемого концентрата оценивали:

  • по количеству общего белка, составляющего основную нагрузку на последующие стадии очистки;
  • по количеству инфекционного титра вируса в концентрате, позволяющего определить степень концентрирования;
  • по содержанию D-антигена (специфические структуры на поверхности вирусной частицы [14], способные вызывать индукцию нейтрализующих антител) как целевого продукта, определяющего потенциал ИПВ.

Материалы и методы

Для проведения работ по концентрированию использовали две лабораторные УФ-системы двух производителей: кассеты немецкой фирмы (I) с мембранами 100 кДа и автоматизированную систему американской фирмы (II) с мембранами 50, 100 и 300 кДа. Сравнительная характеристика УФ-мембран представлена в табл. 1. Процессы концентрирования вирусного сбора проводили в соответствии с условиями производителей.

Таблица 1. Характеристика УФ-мембран
Table 1. Characteristics of ultrafiltration membranes

Для репродукции вируса полиомиелита использовали перевиваемую культуру клеток линии Vero (ФНЦИРИП им. М.П. Чумакова РАН). Наработку культуры-продуцента проводили в спиннерных колбах («Bellco») рабочим объемом 3 л в условиях псевдосуспензии. В качестве микроносителей использовали «Cytodex 1» («GE Healthcare») в концентрации 3 г/л.

Клетки выращивали в питательной среде Игла МЕМ (ФНЦИРИП им. М.П. Чумакова РАН) с добавлением 5% эмбриональной телячьей сыворотки (ООО «Биолот»). Для получения вирусной суспензии использовали аттенуированный штамм Сэбина полиовируса типа 1 — LSc, 2аb (ФНЦИРИП им. М.П. Чумакова РАН). Множественность заражения клеток составляла 0,02 ТЦД50 (тканевая цитопатогенная доза) на клетку. Получены две серии ВСЖ (титры 5,0 и 7,52 ТЦД50/мл) для достижения целей работ, описанных выше.

Осветляющую и стерилизующую фильтрацию вирусного сбора проводили через 50–55 ч после заражения с использованием вакуумных бутылочных фильтров «Steritop» («Merсk Millipore») с диаметром пор 0,45 и 0,22 мкм. Перед проведением фильтрации ВСЖ отделяли от осадка частиц микроносителя декантированием.

Специфическую активность вируса определяли по стандартной методике на культуре клеток Hep-2 Цинциннати. Выражали титр в lg ТЦД50/мл1.

Концентрацию общего белка определяли по методике Лоури без осаждения2.

Присутствие бычьего сывороточного альбумина в образцах определяли с помощью электрофореза в полиакриламидном геле по общепринятой методике3.

Образцы концентратов и фильтратов с каждого этапа концентрирования (50, 100, 300 кДа) подвергали электрофорезу по методу Лэмли в присутствии додецилсульфата натрия3. Разделённые в 12% полиакриламидном геле белки переносили на мембрану из поливинилиденфторида («GE Healthcare»). Для предотвращения неспецифического связывания антител мембрану промывали блокирующим раствором (20 мМ Трис-HCl, рН 8,0, 150 мМ NaCl, 0,05% Tвин 20, 5% сухое молоко), затем инкубировали с первичными антителами (табл. 2), которые связываются с исследуемым белком. Мембрану промывали для удаления всех несвязанных первичных антител и инкубировали с конъюгированными вторичными антителами (табл. 2), которые связываются с первичными антителами. Мембрану промывали для удаления всех несвязанных вторичных антител и инкубировали с субстратом ECL-Plus («GE Healthcare»), который реагирует с конъюгированными вторичными антителами для обнаружения расположения белка. Хемилюминесцентное излучение экспонировали на рентгеновскую пленку («Kodak»).

Таблица 2. Характеристика первичных и вторичных антител
Table 2. Characteristics of primary and secondary antibodies

В настоящее время главным способом определения содержания D-антигена в ИПВ является иммуноферментный анализ [15]. Для количественного определения целевого продукта использовали метод твердофазного иммуноферментного анализа в «сэндвич»-варианте на основе специфических антител класса Y яичных желтков [16].

Результаты и обсуждение

На первом этапе работ была проведена ультрафильтрация с использованием мембран двух производителей с одинаковыми показателями по отсечению.

Фильтрацию и концентрирование ВСЖ (5,0 ТЦД50/мл) проводили с использованием кассет с отсечением 100 кДa двух производителей: Германии (I) и США (II). В фильтратах, полученных в результате концентрирования, инфекционных вирусных частиц и D-антигена не обнаружено. Результаты анализов полученных концентратов представлены в табл. 3.

Таблица 3. Результаты анализов концентратов вируса полиомиелита типа 1, полученных при использовании кассет I и II с отсечением 100 кДа (M ± m)
Table 3. Results of analyses of poliovirus type 1 concentrates obtained using cassettes I and II with 100 kDa cut-off (M ± m)


Примечание. *р < 0,05 по сравнению с кассетой I (непарный, двухвостовой t-критерий Стьюдента).
Note. *р < 0,05 compared to cassette I (unpaired, two-tailed Student’s t-test).

Титры вируса и содержание общего белка в концентратах, полученных с использованием обоих мембранных фильтров, статистически достоверно не различались. Разница в содержании D-антигена составляла не более 10%.

Полученные результаты показывают, что оба типа мембранных кассет могут быть использованы для концентрирования ВСЖ вируса полиомиелита типа 1.

На втором этапе исследований была проведена ультрафильтрация ВСЖ (7,52 ТЦД50/мл) вируса полиомиелита типа 1 с использованием мембран с отсечением 50, 100 и 300 кДа (I). Содержание D-антигена в концентрате, полученном с использованием мембраны с отсечением 100 кДа, было статистически достоверно выше показателей, полученных при использовании кассет с отсечением 50 и 300 кДа (табл. 4). Титры вируса в концентратах, полученных с использованием всех трёх типов мембран, достоверно не различались. По содержанию общего белка минимальный показатель был у концентрата, приготовленного при использовании мембраны с отсечением 300 кДа. Аналогичные показатели в двух других концентратах не различались и были статистические достоверно выше.

Таблица 4. Результаты анализов концентратов вируса полиомиелита типа 1, полученных при использовании кассет с отсечением 50, 100 и 300 кДа в сравнении с исходной ВСЖ (M ± m)
Table 4. Results of analyses of poliovirus type 1 concentrates obtained using 50, 100 and 300 kD cut-off cassettes in comparison with the original viral suspension (M ± m)


Примечание. р < 0,05 по сравнению с: *исходной ВСЖ, +отсечением 100 кДа, ++отсечением 300 кДа (непарный, двухвостовой t-критерий Стьюдента).
Note. р < 0,05 compared to: *original viral suspension; +100 kD and ++300 kD cut-off cassettes (unpaired, two-tailed Student’s t-test).

Для оценки потерь целевого продукта фильтраты, полученные во время процессов концентрирования, также были проанализированы по показателям: специфическая активность вируса, содержание D-антигена и общего белка. Содержание общего белка в фильтратах также согласовалось с данными, полученными в концентратах: 0,18 ± 0,02, 0,19 ± 0,02 и 1,38 ± 0,1 мг/мл для кассет с отсечением 50, 100 и 300 кДа соответственно. Инфекционные вирусные частицы и D-антиген в фильтратах не обнаружены.

Получаемый полупродукт с использованием мембран с отсечением 300 кДа является наиболее оптимальным с точки зрения очистки концентрата от примесных белков и оценки его чистоты. По содержанию целевого продукта полученные концентраты отличаются не более чем на 15% от концентратов, полученных при использовании мембран с отсечением 100 кДа, что позволяет использовать мембраны с отсечением 300 кДа.

Для оценки фактического отсечения клеточных и вирусных компонентов мембранами 50, 100 и 300 кДа в соответствующих фильтратах и концентратах, а также определения компонентов, составляющих основную белковую нагрузку концентратов, использовали электрофорез в полиакриламидном геле и вестерн-блоттинг. Клеточные компоненты были выбраны на основании их масс в диапазоне 40–170 кДа. На рис. 2 представлены результаты вестерн-блоттинга выбранных компонентов.


Рис. 2
. Вестерн-блот-анализ концентратов (С), фильтратов (F) и вируссодержащей жидкости (S) с использованием антител к α-актину (a), фактору инициации трансляции (eIF4GI) (б), нуклеопоринам Nup 96 (в) и Nup 153 (г).
На рисунке указаны продукты расщепления нуклеопоринов (c.p.).
Fig. 2. Western blot analysis of concentrates (C), filtrates (F), and viral suspension (S) using antibodies to α-actin (a), eIF4GI factor (b), nucleoporins Nup 96 (с) and Nup 153 (d). Тhe figure shows the cleavage products of nucleoporins (c.p.).

Несмотря на то что актин (рис. 2, a), имеющий молекулярную массу 42 кДа и размер 4–9 нм, является глобулярным, он полностью концентрируется мембранами на 100 и 300 кДа. Вероятно, это обусловлено связыванием актина с другими компонентами ВСЖ с образованием соединений с массой, превышающей отсечения пор.

На рис. 2, в, г представлены продукты расщепления нуклеопоринов Nup 96 и Nup 153 [17] в конце полиовирусной инфекции, которые одинаково удерживаются рассматриваемыми мембранами.

Фактор инициации трансляции eIF4GI является белком, который участвует в инициации трансляции эукариот и является компонентом кэп-связывающего комплекса eIF4F. На рис. 2, б представлены продукты расщепления этого белка [18]. Только при концентрировании ВСЖ кассетой с отсечением 300 кДа небольшая часть продуктов расщепления попадает в фильтрат, а основная масса, как и в случае использования мембран с отсечением 50 и 100 кДа, собирается в концентрате.

Исходя из полученных результатов вестерн-блоттинга, можно сделать вывод о том, что, вне зависимости от показателя отсечения мембраны, подавляющая часть клеточных компонентов ВСЖ не отсекается на стадии осветляющей и стерилизующей фильтрации, а концентрируется и составляет основную белковую нагрузку на целевой продукт.

На следующем этапе исследования для детекции вирусных белков использовали поликлональные кроличьи антитела (ФНЦИРИП им. М.П. Чумакова РАН). На рис. 3 представлен результат вестерн-блот-анализа исследуемых концентратов и фильтратов на капсидный белок полиовируса (VP1), имеющий молекулярную массу 32 кДа [19].


Рис. 3
. Капсидный белок вируса полиомиелита VP1 в концентратах (C), фильтратах (F) и ВСЖ (S).
Fig. 3. Capsid protein of the poliomyelitis virus VP1 in concentrates (C), filtrates (F) and viral suspension (S).

На представленном вестерн-блоте отчётливо видны несколько полос: молекулярной массой 32 кДа — капсидный белок полиовируса (VP1) и полосы, характерные для неспецифического связывания вторичных антител с мембраной. Присутствие в фильтратах различных белковых продуктов вирусной природы может свидетельствовать о том, что в течение полиовирусной инфекции часть вирусных единиц могла не собраться в полный вирион и находится в ВСЖ в виде различных компонентов вируса, включая инфекционную РНК.

Производители УФ-мембран предлагают пользователю очень ограниченную информацию о свойствах УФ-мембран. В табл. 5 представлена характеристика рассматриваемых мембран одного из производителей УФ-оборудования. Производитель заявляет, что мембраны с отсечением 100 кДа задерживают менее 80% альбумина, 300 кДа не задерживают и пропускают его в фильтрат, а мембраны 50 кДа способны задерживать более 95% альбумина в растворе.

Таблица 5. Характеристика мембран по отсекаемым компонентам (%)
Table 5. Characteristics of membranes by cut-off components (%)

Исходя из полученных нами данных, можно сделать предположение, что все мембраны имеют минимальные различия по индикаторному белку — альбумину (рис. 4). Все рассматриваемые мембраны задерживают сывороточный альбумин в равной степени, незначительное отличие имеется только при использовании мембраны 300 кДа.


Рис. 4
. Присутствие бычьего сывороточного альбумина в концентратах (C), фильтратах (F) и вируссодержащей жидкости (S).
Fig. 4. Presence of bovine serum albumin in concentrates (C), filtrates (F), and viral suspension (S).

Заключение

Показано, что применение мембран с тем или иным отсечением не оказывает существенного влияния на основные характеристики целевого продукта. Все использованные в работе мембраны удерживали тестируемые клеточные компоненты и компоненты сыворотки вне зависимости от размера отсечения. Это может быть связано как с конформацией компонентов, что приводит к их удерживанию мембраной, так и с налипанием их на другие компоненты ВСЖ (вирусные частицы). Разница не видна и в отношении вирусных белков, проскок которых в фильтрат практически одинаков для каждого типа мембран.

Применение мембран с отсечением 300 кДа с точки зрения качества получаемого целевого продукта и технологичности производственного процесса является наиболее целесообразным для отработки технологии изготовления ИПВ с использованием вируса полиомиелита штаммов Сэбина и клеток линии Vero в качестве культуры-продуцента.

При проведении процесса ультрафильтрации с мембранами с отсечением 300 кДа процесс концентрирования занимает меньше времени, чем при тех же условиях, но с применением других мембран.

Поскольку получаемый концентрат не является конечным продуктом, а только первой стадией получения ИПВ, основные требования, предъявляемые к качеству концентрата, включают в себя показатели содержания D-антигена и титр вируса, которые сильно зависят от степени концентрирования.

Концентраты также характеризуются содержанием целевого продукта, бычьего сывороточного альбумина и общего белка. Эти компоненты составляют основную нагрузку на стадии очисток полуфабриката (гель-фильтрацию и ионообменную хроматографию) и, соответственно, напрямую влияют на качество очистки получаемого полупродукта на последующих стадиях. Концентраты, полученные с использованием мембран с отсечением 300 кДа, характеризуются наименьшим содержанием бычьего сывороточного альбумина и общего белка (табл. 4). Это позволяет очистить полупродукт (после хроматографических очисток) за меньшее количество циклов и избежать потерь целевого продукта, что является важным для производственного процесса.

 

1. МУК 4.2.2410-08 Организация и проведение вирусологических исследований материалов от больных полиомиелитом, с подозрением на это заболевание, с синдромом острого вялого паралича (ОВП).

2. ОФС.1.2.3.0012.15. Определение белка. Государственная Фармакопея Российской Федерации XIV, том I.

3. ОФС.1.2.3.0023.15. Электрофорез в полиакриламидном геле. Государственная Фармакопея Российской Федерации XIV, том I.

 

Список литературы

1. Бичурина М., Романенкова Н., Розаева Н., Воротникова В. Глобальная ситуация по полиомиелиту. Стратегия и тактика ВОЗ по ликвидации полиомиелита. Журнал инфектологии. 2011; 3(2): 5–14. https://doi.org/10.22625/2072-6732-2011-3-2-5-14

2. Харит С., Покровский В., Рулёва А., Фридман И. Программа эрадикации полиомиелита ВОЗ: проблемы и решения. Педиатрическая фармакология. 2016; 13(3): 289–98. https://doi.org/10.15690/pf.v13i3.1580

3. Simizu B., Abe S., Yamamoto H., Tano Y., Ota Y., Miyazawa M., et al. Development of inactivated poliovirus vaccine derived from Sabin strains. Biologicals. 2006; 34(2): 151–4. https://doi.org/10.1016/j.biologicals.2006.02.010

4. Thomassen Y.E., van't Oever A.G., Vinke M., Spiekstra A., Wijffels R.H., van der Pol L.A., et al. Scale-down of the inactivated polio vaccine production process. Biotechnol. Bioeng. 2013; 10(5): 1354–65. https://doi.org/10.1002/bit.24798

5. Thomassen Y.E., van't Oever A.G., van Oijen M.G.C.T., Wijffels R.H., van der Pol L.A., Bakker W.A.M., et al. Next generation inactivated polio vaccine manufacturing to support post-polioeradication biosafety goals. PLoS One. 2013; 8(12): e83374. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0083374

6. Bakker W.A.M., Thomassen Y.E., van't Oever A.G., Westdijk J., van Oijen M.G.C.T., Sundermann L.C., et al. Inactivated polio vaccine development for technology transfer using attenuated Sabin poliovirus strains to shift from Salk-IPV to Sabin-IPV. Vaccine. 2011; 29(41): 7188–96. https://doi.org/10.1016/j.vaccine.2011.05.079

7. Furtak V., Roivainen M., Mirochnichenko O., Zagorodnyaya T., Laassri M., Zaidi S.Z., et al. Environmental surveillance of viruses by tangential flow filtration and metagenomic reconstruction. Euro Surveill. 2016; 21(15): pii30193. https://doi.org/10.2807/1560-7917.ES.2016.21.15.30193

8. Guskey L.E., Wolff D.A. Concentration and purification of poliovirus by ultrafiltration and isopycnic centrifugation. Appl. Microbiol. 1972; 24(1): 13–7.

9. Van Ramshorst J.D. The concentration of poliovirus antigens for D-antigen determination. Bull. World Health Organ.1967; 36(2): 209–18.

10. Theiler M., Bauer J.H. Ultrafiltration of the virus of poliomyelitis. J. Exp. Med. 1934; 60(6): 767–72. http://doi.org/10.1084/jem.60.6.767

11. Sabin A.B., Hennessen W.A., Warren J. Ultrafiltration and electron microscopy of three types of poliomyelitis virus propagated in tissue culture. Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 1954; 85(2): 359– 63. https://doi.org/10.3181/00379727-85-20881

12. Комиссаров А.В., Алешина Ю.А., Громова О.В., Никифоров А.К., Еремин С.А., Волох О.А. и др. Применение ультрафильтрации для концентрирования и очистки антигенов. Проблемы особо опасных инфекций. 2015; (1): 79–84.

13. Кызин А.А., Загидуллин Н.В., Гелич Л.В., Тимербаева Р.Х., Исрафилов А.Г. Очистка и концентрирование вируса гриппа методом микро и ультрафильтрации. Вестник Башкирского университета. 2014; 19(4): 1223–7.

14. Ferguson M., Wood D.J., Minor P.D. Antigenic structure of poliovirus in inactivated vaccines. J. Gen. Virol. 1993; 74 (Pt. 4): 685–90. https://doi.org/10.1099/0022-1317-74-4-685

15. Rezapkin G., Martin J., Chumakov K. Analysis of antigenic profiles of inactivated poliovirus vaccine and vaccine-derived polioviruses by block-ELISA method. Biologicals. 2005; 33(1): 29–39. https://doi.org/10.1016/j.biologicals.2004.11.001

16. Иванов А.П., Козлов В.Г., Клеблеева ТД., Иванова О.Е., Киктенко А.В. Система иммуноферментного анализа на основе специфических антител класса (IgY) из яичных желтков для количественного определения D-антигена в инактивированных полиовирусных вакцинах. Вопросы вирусологии. 2014; 59(6): 39–42.

17. Park N., Katikaneni P., Skern T., Gustin K.E. Differential targeting of nuclear pore complex proteins in poliovirus-infected cells. J. Virol. 2008; 82(4): 1647–55. https://doi.org/10.1128/jvi.01670-07

18. Cardinali B., Fiore L., Campioni N., De Dominicis A., Pierandrei-Amaldi P. Resistance of ribosomal protein mRNA translation to protein synthesis shutoff induced by poliovirus. J. Virol. 1999; 73(8): 7070–6. https://doi.org/10.1128/jvi.73.8.7070-7076.1999

19. Hogle J.M., Chow M., Filman D.J. Three-dimensional structure of poliovirus at 2.9 A resolution. Science. 1985; 229(4720): 1358–65. https://doi.org/10.1126/science.2994218


Об авторах

А. А. Ковпак
Федеральный научный центр исследований и разработки иммунобиологических препаратов имени М.П. Чумакова РАН
Россия

Ковпак Анастасия Александровна — младший научный сотрудник лаборотории молекулярной биологии вирусов

Москва



Ю. Ю. Ивин
Федеральный научный центр исследований и разработки иммунобиологических препаратов имени М.П. Чумакова РАН
Россия

Ивин Юрий Юрьевич — научный сотрудник лаборатории молекулярной биологии вирусов

Москва



А. Н. Пиняева
Федеральный научный центр исследований и разработки иммунобиологических препаратов имени М.П. Чумакова РАН
Россия

Пиняева Анастасия Николаевна — младший научный сотрудник лаборатории молекулярной биологии вирусов

Москва



Ю. Х. Хапчаев
Федеральный научный центр исследований и разработки иммунобиологических препаратов имени М.П. Чумакова РАН
Россия

Хапчаев Юсуф Хаджи-бекович — доктор биологических наук, начальник отделения полиомиелитной вакцины

Москва



С. В. Ожерелков
Федеральный научный центр исследований и разработки иммунобиологических препаратов имени М.П. Чумакова РАН
Россия

Ожерелков Сергей Викторович — доктор биологических наук, ведущий научный сотрудник лаборатории клещевого энцефалита и других вирусных энцефалитов

Москва



А. В. Белякова
Федеральный научный центр исследований и разработки иммунобиологических препаратов имени М.П. Чумакова РАН
Россия

Белякова Алла Владимировна — кандидат биологических наук, учёный секретарь

Москва



А. А. Ишмухаметов
Федеральный научный центр исследований и разработки иммунобиологических препаратов имени М.П. Чумакова РАН; Первый Московский государственный медицинский университет имени И.М. Сеченова (Сеченовский Университет)
Россия

Ишмухаметов Айдар Айратович — доктор медицинских наук, профессор, член-корреспондент РАН, генеральный директор ФНЦИРИП им. М.П. Чумакова РАН; заведующий кафедрой организации и технологии иммунобиологических препаратов ПМГМУ им. И.М. Сеченова (Сеченовский Университет)

Москва



Просмотров: 150


Creative Commons License
Контент доступен под лицензией Creative Commons Attribution 4.0 License.


ISSN 0372-9311 (Print)
ISSN 2686-7613 (Online)